የዲኤንኤ ቅደም ተከተል (ዲኤንኤኤን) በቅደም ተከተል በእውነተኛ የዲ ኤን ኤ እምሰትን (ጄምስ ኤንድ ኤን ኤፍ) ለመለየት በእኛ የመጠን ችሎታ ላይ የተመሰረተ ነው.
ዲ ኤን ኤ ቅደም ተከተል
በ 1970 ዎቹ መገባደጃ ላይ ሁለት የዲ ኤን ኤ ሞለኪውሎችን ለመፈተሽ ሁለት የዲ ኤን ኤ ቅደመ ዘዴዎች ተፈጥረው ነበር. እነዚህ እንደ ሳንገር (ወይም ዲዴይሲ) ዘዴ እና ማክስማ-ጊልበርት (የኬሚካል ስንጥቅ) ዘዴ ናቸው. የካልማም-ጊልበር ዘዴ በኬሚካሎች ናዩክሊዮይድ-የተወሰነ ኬሚካላዊ ተቆራርጦ የተመሠረተው እና ኦሜጉኑክዮታይዶችን (አብዛኛዎቹ ከ 50 የመሠረት ጥንድ ጥንድ ጥንድ ያነሰ የአምስት ኑክሊዮይድ ፖሊመሮች) ቅደም ተከተል ለማድረግ ነው. የሲንጀር ዘዴ በጣም በተለምዶ ጥቅም ላይ ይውላል ምክንያቱም በቴክኒካዊ ምቹነት ለማግኘትም የተረጋገጠ ስለሆነ, ከ PCR መገኘት ጋር እና ቴክኒካዊ ኢንዲኦቲንግ ሲኖር, አንዳንድ የዲ ኤን ኤ ጥቂቶችን ጨምሮ ዲ ኤን ኤን ለማጣራት ቀላል ነው. ይህ ዘዴ በ PCR የምጥቀት ቅኝቶች ወቅት በዲዲዮክስክሊዮታይድ በሲድሊን ማቋረጥ ላይ የተመሰረተ ነው.
የነርስ ዘዴ
በሲንጀር ዘዴ ውስጥ ለመተንተን የዲ ኤን ኤ ክፋይ እንደ አብነት ጥቅም ላይ ይውላል እና በ PCR ግብረ-መልስ (ኤችአይኤንዳይድ) ውስጥ በፕሪኤር (primers) በመጠቀም ረግረጋዉን ክሬን ለማምረት ይጠቀማል.
ከተለያዩ አራት ኒክሊዮታይዶች (ATP, CTP, GTP ወይም TTP) የተወሰኑ የ dideoxynucleoside triphosphate (ddNTP) አመልካቾች መቶኛ ይይዛሉ. የአዲሱ የዲ ኤን ኤ ሽክርክሪት (ኦኤን ኤ) በዚህ ሂደት ውስጥ ከነዚህ አንዱን ናምሩክ እስከሚቀጥለው ድረስ ይቀጥላል.
እያንዳንዱ PCR ግብረመልስ የተለያዩ የዲ ኤን ኤ ክሮች ድብልቅ የሆነ ድብልቅ የያዘ ሲሆን በመጨረሻም በዲዮይድ የተቀመጠውን የኒዮክሳይድ ምልክት ይደመደማል. የኬል ኤሌትሮፊይስ ( ኤሌክትሮኬሲስ ) የአራቱን ምላሾች ክሮች መለየት እና በአራት የተለያዩ ሌይኖች ለመለየት ጥቅም ላይ ይውላል, እና የየትኛው ሰንሰለቶች በየትኛው ኑክሊዮታይድ ውስጥ ምን ዓይነት ርዝመት እንዳላቸው ይወሰናል.
በአውቶማቲክ ሪንደር ግፊት ውስጥ, አራት የተለያዩ ቀለሞች ያሏቸው fluorescent መለያዎች የተሰየሙ አንጸባራቂዎች ጥቅም ላይ ይውላሉ. በተለያየ ዲዮይድዮክዩይድቶይዶች ፊት የተገኘ PCR ምላሾች, ከላይ እንደተገለፀው ይከናወናሉ. ይሁን እንጂ በቀጣዮቹ አራት የአሠራር ድብልቅ ነገሮች ላይ አንድ ላይ ተጣምሮ በአንድ የአየር ፍሳሽ ውስጥ ይሠራሉ. የእያንዳንዱ ክፍልፋይ ቀለም በጨረራ ጨረር በመጠቀም ተገኝቶ መረጃው የሚሰበሰው በኮምፕዩተር ሲሆን ክሮሞግራሞቹ በእያንዳንዱ ቀለም የተለያየ ቀለም ያላቸውን ጥቃቅን ክምችቶችን በሚያሳዩ ኮምፒዩተሮች ይሰበሰባሉ.
በተለምዶ, ራስ-ሰር የቅደም ተከተል ዘዴዎች ቢበዛ እስከ 700-800 የመሠረት ጥንድ ርዝመት ሊኖራቸው ይችላል. ሆኖም ግን, የተራቀቁ ጂኖች ሙሉ በሙሉ ቅደም ተከተሎችን, እንዲሁም, በመሠረቱ, አጠቃላይ ጂኖዎች, እንደ የእርከን መራመድ እና የሶስት ጎን ዝግጅቶች የመሳሰሉ ደረጃዎች ያሉ ዘዴዎችን መጠቀም ይችላሉ.
ከተለመደው የጂን ተጨባጭነት አንጻር ሲንዊን ዘዴ በመጠቀም በቅደም ተከተል መከተል ይቻላል. አዳዲስ አምራቾች የሚመደቡት ከዋና ቅደም ተከተላቸው እና ከተለመዱ ምላሾች ውጭ የነበረውን የጀነቲን ክፍል ቅደም ተከተል ለማራዘም ነው.
የሻትጎን ቅደም ተከተል የዲኤንኤ ክፍፍልን ይበልጥ በተገቢው (የሚቀናበሩ) የእንቆቅልሽ ቁርጥራጮች በመቀነስ, እያንዳንዱን ፍርግርግ ቅደም ተከተል በመደርደር, እና በንጥልጥል ቅደም ተከተል ላይ በመመርኮዝ እንክብሎችን ያሰናክላል. እነዚህ ዘዴዎች ተደራራቢውን ክፍል ለማቀናጀት በኮምፒተር ሶፍትዌሽን ትግበራ በኩል ይህን ዘዴ ቀላል አድርጎታል.