የ polymerase chain reaction (PCR) ምልከታዎች መለዋወጥ የውጤቱን ጥራት መለወጥ ወይም የጥረት ምርቱን እና ጥራቱን በማሻሻል ወይም በመቀነስ ወይም የተለመዱ ልዩነቶችን እና የስሜት መለዋወጥ በማሻሻል. የመጨረሻ ውጤቱን የሚወስዱ ልኬቶችም አካላዊ (ማለትም, የሙቀት መጠን, የኪውት ጊዜዎች) ወይም ኬሚካዊ (ማለትም, አብነት መጠን, ጥቅም ላይ የዋለ ኢንዛይም አይነት) ሊሆን ይችላል. ከ PCR ስኬት ጋር ተፅእኖ ያላቸው በርካታ ቁልፍ ነገሮች ከዚህ በታች ቀርበዋል.
01 ንጹህ የላቦራቶሪ ሁኔታዎች
ፒ.ዲ. አንድ ዲ ኤን ኤ አንድ ዲ ኤን ኤ ለመለየት የሚያስችል ብቃት ስለሚያደርግ የላቀውን ሁኔታ በቤተ ሙከራ ውስጥ ማቆየት አስፈላጊ ነው. ምንጊዜም ቢሆን ንጹህ ጓንሶች ይለጥፉ, የተጣራ መስታወት, ቱቦዎች እና የ pipette ጠቃሚ ምክሮችን እና የዉሃ መፍትሄዎችን ይጠቀማሉ እና ሥራ ከመጀመሩ በፊት የሥራውን ቦታ ያጽዱ.
ትክክለኛውን ናሙና በማስተካከሉ ውጤቱን ለማረጋገጥ በእርግጥ የምርመራ ግብረመልሶች, ያለምንም ዲ ኤን ኤ እና ያለ ኤንዛይም ያካትቱ.
አብዛኛው ሰዎች ችግሩን ለማቃለል የራሳቸውን የተሻሉ መፍትሄዎች አያገኙም, እና ለተመረጡ ፒፕተሮች ብዙ ጊዜ ለ PCR ብቻ የተቀመጡ ናቸው. DNase እና RNase-free PCR ቱቦዎች, የበረሮ መከላከያ የፒፖች ምክሮች እና በ UV መብራት ውስጥ በኩምበር ውስጥ መስራት ችግሮችን ለመቀነስ ይረዳሉ.
የኬሚካል አካላት
- ከ 18 እስከ 24 መቀመጫዎች አላቸው
- ሁለተኛ ደረጃ መዋቅር የለም (ማለትም, የጸጉር ቀበቶዎች ቀለበቶች)
- የ G / C እና A / T ጥንድ ሰላማዊ ሚዛን እንዲኖር ያድርጉ
- በ 3 ጫማ ጫፎች ላይ እርስ በርስ የተጠላለፉ አይደሉም
- ከ 5 እስከ 10 ዲግሪ ሴልሲየስ የሙቀት መጠን ይቀንሳል (ከቲ) 55 ሴንቲግሬድ ሴልሴስ
ለሁለቱም አንደኛዎችም ለትክክለኛ ውጤቶች ተመሳሳይ መሆን አለባቸው.
03 የግብረመልስ ቅልቅል: አብነት እና ቅርፀቶች
ከፍተኛ መጠነ-ህዋስ ከ 0.1 እና 0.6 ሚሜሮል / ሊ መካከል ይገኛል. የአብሮቹን ብዛት እንደ ዲ ኤን ኤ ዓይነት (ሰው, ባክቴሪያ, ፕሲሲዲድ) ይለያያል.
በጣም ዝቅተኛ አብነት ባለው ቅርፅ, እንደ የተሻሻለ የዝግ ቁጥር ወይም "ትኩስ ጅምር" መጠቀም ያሉ ውጤቶችን ለማሻሻል ሌሎች ስልቶች አሉ. ከእርስዎ የተወሰኑ የሙከራ ሁኔታዎች ውስጥ እንደሚሰሩ ለማረጋገጥ ሁልጊዜ አዎንታዊ ቁጥጥራዊ ምላሹን አዲስ አዳነቶችን ይፈትሹ.
04 የግብረመልስ ቅልቅል: ኢንዛይም እንቅስቃሴ
በተሰጠው ቅልቅል ውስጥ የሚገኙት MgCl2 ትኩረታቸው PCR ውጤት ላይ ተጽእኖ ሊያሳድር ስለሚችል በጣም ፈጣን በሆኑ ድርጊቶች ውስጥ ትልቅ ሚና ሊጫወቱ ይችላሉ. የማቲኔሲየም ኬሚስትሪ (ፖሊቲሜሽ ኤንዛይም) የሚረዳውን ትክክለኛውን ንጣፍ ለማምረት ከ dNTPs ጋር የሚሟሙ ውስብስብ ፎቆች ናቸው.
የአራቱም dNTP ዎች እኩል መጠን የ polymerase ስህተት መጠንን ለመቀነስ ይረዳል. የተወሰኑ ተጨማሪ ኬሚካሎች, ማለትም ቤቴን, የቢኤስ, ዲተርጀር, ዲኤምሲ, ጋሲሰር, እና ፒሮፊፋሳተሲ የመሳሰሉ ንጥረ ነገሮች የኢንዛይም ልዩነት ወይም አፈፃፀም ላይ ተጽእኖ ሊያሳድሩ ይችላሉ.
05 የ Thermocycler ዓይነት
ላቦራቶሪ መሣሪያ ሲገዙ አንዳንድ የኤሌክትሪክ ንጣፎች ትክክለኛ እና ተስማሚ የአየር ሙቀት መጠን በመጠበቅ ረገድ ከሌሎቹ ይበልጥ እምብዛም አይጠፉም.
ይህ በጣም ዝቅተኛ በሆነበት ጊዜ ለቅጽበት ምላሽ በሚሰጥበት ጊዜ ወይም ትንሽ ጠባብ የአየር ክሬን ማቀዝቀዣ የሚጠይቁ ጥይቶችን በመጠቀም የሚከፈልበት ቦታ ነው.
ትክክለኛውን ቴርሞግራም ቢዝነስ ለመገጣጠም የተሰሩ የታጣጣይ ቴርኮቭስ መለኪያዎች, የሙቀት ምጣኔን ለማመቻቸት ያግዛሉ.
06 የቋሚ ቅንጅቶች
ተጨማሪ የንብረት ማጉላትን ለማስፋት አነስተኛውን ኢንዛይመንትን ለማካካስ የዝግጅቱን ጊዜ በ 20 ዎቹ ዙሮች በመጨመር ማግኘት ይቻላል. በአብዛኛው ከ 40 ድግግሞሽ ያነሰ የዲ ኤን ኤ ሞለኪዩላትን (ኤንዲየር ሞለኪዩሊስ) ለማነፃፀር በቂ ነው.